1. Bir tüp donmuş hücre alırsam, saklama için doğrudan sıvı nitrojene koyabilir miyim?
Çoğu durumda, kuru buz (-80°C) üzerinde taşınan hücreler sıvı nitrojene geri konabilir ve daha sonra hızla çözülebilir.Bununla birlikte, bu tür bir tedaviden sonra hücre canlılığı azalabilir.Bazı hassas hücre hatları için bu, hücre kurtarmayı daha zor hale getirebilir.Bu fenomenin, sıcaklık değişiminin bir sonucu olarak hücreler içindeki buz kristallerinin yapısındaki bir değişiklikten kaynaklandığı düşünülmektedir.Bu nedenle, hücrelerin alındıktan sonra mümkün olan en kısa sürede eritilmesi ve kültürlenmesi önerilir.-80°C'de saklama süresini azaltın.Bu sıcaklık sadece taşıma için kullanılır.
2. Geri kazanım için hücreleri sıvı nitrojenden çıkarırken hangi güvenlik önlemleri alınmalıdır?
Tamamen sızdırmaz olmayan ve içlerine sıvı nitrojen sızan sıvı nitrojen içindeki hücre kriyotüpleri, çözülürken kriyotüpün sıcaklığı keskin bir şekilde yükselirse patlamaya neden olabilir.Bu nedenle, hücreleri sıvı nitrojenden çıkarırken gözlük ve koruyucu eldiven giyilmesi tavsiye edilir.Resüsitasyon için, dondurma solüsyonunu 1-2 dakika içinde tamamen çözmek için dondurma tüpü 37°C'lik bir su banyosunda sürekli çalkalanmalıdır.Daha sonra tüpün dışını alkollü bir bezle silin, ardından ultra temiz tablaya alın ve hücreleri 10 ml kültür ortamı eklenmiş bir santrifüj tüpüne aktarın, 1000 rpm'de 5-10 dakika santrifüjleyin, atın. süpernatant, uygun miktarda kültür ortamı ekleyin ve kültür şişesine inoküle edin ve %5 CO2 inkübatöründe inkübe edin.
3. Hücreler neden sıvı faz yerine sıvı nitrojen tankının buhar fazında saklanmalıdır?
Sıvı nitrojenin gaz fazında depolanan hücrelerin yeniden canlanma olasılığı daha yüksektir.Sıvı nitrojenin sıvı fazında ise, liyofilizasyon tüpleri uygun şekilde kapatılmamışsa veya sızıntı varsa, hücreler ve sıvı nitrojen arasındaki doğrudan temas, çözüldükten sonra hücrelerin canlılığını tehlikeye atabilir.
4. Süspansiyon hücreleri için kültür ortamını nasıl değiştirebilirim?
Süspansiyon hücrelerinin kültürlenmesi, basitçe taze ortamın eklenmesiyle (boşluk izin veriyorsa) veya hücrelerin eski ortamdan santrifüjleme (5 dakika boyunca 100 xg) ile ayrılması ve ardından çökeltilen hücrelerin taze ortamda yeniden süspanse edilmesiyle yapılabilir.Bununla birlikte, çoğu süspansiyon hücre dizisi için, sadece ortam eklemek daha iyi bir yöntemdir.Her iki durumda da, hücreler en yüksek doygunluk yoğunluğuna ulaşmadan önce ortamın yenilenmesi gerekir.Hücrelerin doyma yoğunluğu, hücre hattına ve kültür koşullarına (dinlenme veya karıştırma, oksijenlenme seviyeleri vb.) bağlı olarak 3 x 105 ile 2 x 106 arasında değişir.Hücrelerin logaritmik olarak büyümesini sağlamak için yeterli besin geri kazanımına izin vermek için hücreler daha düşük bir hücre konsantrasyonuna seyreltilmelidir.Ortam, hücre yoğunluğunu azaltmadan basitçe değiştirilirse, hücreler ortamı hızla tüketecek ve ölecektir.Hücreler en küçük yoğunluklarının altında seyreltilirse, bir gecikme aşamasına girecek ve çok yavaş büyüyecek veya öleceklerdir.Her süspansiyon hücre hattının farklı bir doygunluk yoğunluğu ve geçiş aralığı vardır, bu nedenle günlük hücre sayıları, süspansiyon hücre hatlarını izlemenin yoludur*.
5. Hücre kültürü için önerilen CO2 seviyesi nedir?
Hücre kültürü sistemlerindeki CO2 seviyeleri %0,03 ila %40 arasında değişse de (tipik olarak atmosferde yaklaşık %0,03 CO2), havaya CO2 eklenmemesi veya %5 ila %10 CO2 konsantrasyonunun olması çok yaygındır.Gaz fazındaki CO2 seviyesi ile dengelemek için ortamdaki sodyum bikarbonat konsantrasyonunun ayarlanması önemlidir.Hücreler CO2 üretir ve büyüme ve hayatta kalabilmek için az miktarda karbonik asit gerektirir.CO2 eklenmemişse ve hücreler çoğalıyorsa, 4 mM (0.34 g/L) susuz sodyum bikarbonat kullanılabilir.Ancak bu noktada kültür şişesinin kapağı sıkılmalıdır.Kültür sistemi %5 veya %10 CO2 gerektiriyorsa, başlangıçta yaklaşık 7,6 pH ile sırasıyla 37°C'de 23,5 mM (1,97 g/L) veya 47 mM (3,95 g/L) sodyum bikarbonat kullanın.Bu koşullar altında, gaz dengesini korumak için şişenin kapağı açık bırakılmalı veya bir Petri kabı kullanılmalıdır.
6. Neden bazı hücreler sodyum piruvata ihtiyaç duyar?Ortama ne kadar sodyum piruvat eklemeliyim?
Piruvat, hücreye kolayca giren ve çıkan glikolitik yoldaki* bir organik asit metabolitidir.Bu nedenle, ortama sodyum piruvat ilavesi, anabolizma için hem bir enerji kaynağı hem de bir karbon kaynağı sağlar, belirli belirli hücrelerin korunmasına yardımcı olur, hücre klonlanmasına yardımcı olur veya ortamdaki serum konsantrasyonları azaldığında ihtiyaç duyulur.Sodyum piruvat ayrıca floresan kaynaklı sitotoksisiteyi azaltmaya yardımcı olur.Sodyum piruvat genellikle 1 mM'lik bir nihai konsantrasyonda eklenir.ticari olarak temin edilebilen sodyum piruvat çözeltileri genellikle 100 mM depolama çözeltisidir (100X).
www.DeepL.com/Translator (ücretsiz sürüm) ile çevrilmiştir.
Gönderim zamanı: Haziran-21-2022